Coinlabo: Préparation des solutions

Calcul des solutions molaires, pourcentage et X

1. Une solution molaire est une solution d'un litre contenant la masse égale à son poids moléculaire.
exemple : pour faire 100 ml une solution 5 M de NaCl :
58,456 (PM du NaCl) g X 5 moles X 0,1 L = 29,29 g dans un volume final d'eau de 100 ml
2. Solution en pourcentage :
le pourcentage (m/v) = poids (g) dans 100 ml de solution
le pourcentage (v/v) = volume (ml) dans 100 ml de solution
exemple : pour faire une solution à 0,7 % d'agarose TBE, il faut peser 0,7 grammes d'agarose et amener le volume à 100 ml avec du tampon T. B. E.
3. Solution X .
Beaucoup de tampons d'enzymes sont préparés avec des solutions concentrées, par exemple 5 X. ou 10 X. (cinq ou dix fois la concentration de la solution de travail) et son dilués d'autant pour atteindre une concentration finale du tampon solution de 1 X.
exemple : pour un volume final de 25 µl, on devra ajouter 2,5 µl de tampons 10 X., les autres composés, et l'eau sont apportées à un volume final de 25 µl.

Préparation des solutions de travail depuis des stocks concentrés

Beaucoup de tampons en biologie moléculaire demandent les mêmes composés mais leur concentration varie souvent. Pour éviter de faire à chaque fois un tampon, il est utile de préparer plusieurs solutions stocks concentrées et de diluer au besoin.

Exemple pour faire 100 ml de tampon T. E. (10 mM Tris, 1mM EDTA), il faut mélanger 1 ml d'une solution Tris 1M et 0,2 ml d'EDTA 0,5M et 98,8 ml d'eau stérile.

Etapes dans la préparation d'une solution

1. Se référer au manuel de laboratoire pour la préparation d'une solution particulière, regarder l'étiquette des produits chimiques pour les précautions particulières d'utilisation.

2. peser la quantité voulue de produits chimiques. Utilisez une balance analytique si la quantité est inférieure à 0,1 g.

3. Placer les produits chimiques dans le récipient approprié avec un barreau magnétique.

4. Ajoutez un peu moins que la quantité d'eau désirée. Préparer toutes les solutions avec de l'eau distillée deux fois.

5. Quand le produit chimique dissous, transféré dans un cylindre gradué et ajoutez la quantité désirée d'eau distillée pour atteindre le volume final. Une exception et la préparation de solution contenant de l'Agar de l'agarose : peser directement dans le récipient final.

6. Si la solution doit être un pH spécifique, vérifier au pH mètre.

7. autoclaver, si possible, à 121 °C pendant 20 minutes. Certaines solutions ne peuvent être autoclavées, par exemple, le SDS. Ces solutions doivent être filtrées au travers d'un filtre de 0,22 µm. Les milieux de culture bactérienne doivent être autoclavés le jour de leur préparation, de préférence une à deux heures après. Stockées à température ambiante et vérifier toute éventuelle contamination avant utilisation en remuant doucement la bouteille et vérifiant.

8. Les milieux solides pour les cultures bactériennes peuvent être préparés à l'avance, autoclaver, et stockées dans une bouteille. Lorsque ces nécessaires, l'Agar peut être fondu au micro-ondes, tous les composants additionnels, par exemple les antibiotiques, peuvent être ajoutés et les bois peuvent être coulés.

9. Les solutions concentrées, par exemple Tris-HCl 1M pH=8, NaCl 5M, peuvent être utilisé pour faire des solutions de travail, en ajoutant de l'eau distillée autoclavée dans une vaisselle stérile en quantité appropriée.

Verrerie

Des récipients en verre et en plastique pour la biologie moléculaire doivent être extrêmement propre. Des tubes à essais sales, des contamination bactérienne et des traces de détergents peuvent inhiber des réactions ou dégrader les acides nucléiques. La verrerie doit être rincée avec des veaux distillés et autoclaver à 150 degrés pendant une heure. Pour les expériences avec ARN, la verrerie et les solutions doivent être traitées DEPC afin d'inhiber les RNases qui peuvent être résistantes à l'autoclavage. Le plastique telles que les pipettes et les tubes de culture sont souvent stériles. Les tubes en polypropylène sont troubles et son résistant à beaucoup de produits chimiques, comme le phénol et le chloroforme ; les tubes en polycarbonate ou polystyrène sont claires et sont peu résistants. Faites bien attention aux tubes que vous utilisez.

Rejet des tampons des produits chimiques

Tout Agar ou agarose solidifié doit être rejeté dans la poubelle et non dans l'évier et les bouteilles doivent être bien rincées.
Tout milieu contaminé doit être autoclavé rapidement avant d'être jeté. Les boîtes de pétri et les déchets biologiques doivent être jetés dans des containers adaptés qui doivent être autoclavés avant leur rejet.
Les produits organiques tels que le phénol doive être utilisés sous une Sorbonne et tous les déchets organiques doivent être déposés dans un conteneur identifié mais pas dans une poubelle ni dans l'évier.
Le B. E. T. est une substance mutagène qui doit être traitée avant d'être rejetée et doit être manipulée uniquement avec des gants. Le B. E. T. doit être rejeté dans un conteneur identifié.